Профи

ИММУНОТЕРАПИЯ

Лейкемия (2023 г.) Цитировать эту статью

7 Альтметрика

Подробности о метриках

При гаплоидентичной трансплантации HLA Т-регуляторные клетки (Tregs), введенные совместно с обычными Т-клетками (Tcons), защищают от реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ), сохраняя при этом эффект «трансплантат против лейкемии» (GvL) [1,2,3] . Профилактика РТПХ может быть связана с зависимым от CTLA-4 подавлением CD80/CD86 на дендритных клетках (ДК) [4], в то время как эффект GvL может быть связан со способностью Tregs уменьшать размножение Т-клеток, но не их активацию [4]. 5]. Здесь мы описали избирательную локализацию CD161+ Treg в костном мозге трансплантированных пациентов. Эта популяция, уже описанная как способная продуцировать провоспалительные цитокины [6], может иметь фундаментальное значение для создания микроокружения, способного поддерживать эффект GvL. Было набрано 20 пациентов (дополнительные методы) и проведена гапло-ТГСК с 2 × 106/кг Treg, 1 × 106/кг Tcons и мегадозой CD34+ клеток [1,2,3]. Образцы периферической крови (ПБ) и костного мозга (КМ) собирали через 1, 3, 6 и 12 месяцев после трансплантации.

BM- и PB-ДК анализировали с помощью системы BD FACS Lyric System (BD Biosciences, Ла-Хойя, Калифорния) с использованием антител, перечисленных в дополнительной таблице 1. ДК сортировали с использованием анти-CD123 (для плазмоцитоидных ДК, пДК) и анти-CD123 CD11c Abs (для миелоидных ДК, мДК) (дополнительная таблица 1) и проанализированы с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени на экспрессию индоламин-2,3-диоксигеназы 1 (IDO-1), интерлейкина (IL)-6, IL -10, лиганд запрограммированной смерти 1 (PD-L1) и трансформирующий фактор роста бета 1 (TGFB1) (дополнительная таблица 2). ДК BM- и PB-CD11c+ собирали у пациентов и культивировали совместно с аутологичными CD3+ клетками. Для генерации CD161+ Treg клетки очищали от PB здоровых доноров (HD), культивировали с IL-2, IL-6 и TGF-β и использовали для функциональных анализов (см. «Дополнительные методы»).

Был проведен t-критерий Стьюдента и анализ ANOVA, а затем тест множественного сравнения Тьюки и Сидака. Все статистические тесты оценивались по уровню α 0,05 с использованием Stata версии 13 (StataCorp, Колледж-Стейшн, Техас, США; RRID:SCR_012763) и программного обеспечения GraphPad Prism версии 9 (RRID: SCR_002798, Сан-Диего, Калифорния, США). .

Клинические результаты включенных пациентов (РТПХ; Частота рецидивов; TRM) соответствовали опубликованным данным [3]. Все включенные пациенты имеют полный донорский химеризм. Проточный цитометрический анализ показал, что процент мДК был значительно выше в образцах BM (диапазон: 0,16–2,03%), чем в образцах PB (диапазон 0–0,18%) в первый месяц после трансплантации (рис. 1А). МДК, полученные из BM, экспрессировали более высокие уровни костимулирующего рецептора CD86 (диапазоны MFI PB: 411–548; BM: 603–859) через 12 месяцев после трансплантации (рис. 1B). Никаких различий в пДК не выявлено. ОТ-ПЦР показала, что в ПБ-мДК экспрессия IL-6 и TGF-β постепенно снижалась после трансплантации, тогда как в BM-мДК она оставалась практически неизменной (рис. 1В, Г). В связи с этим через двенадцать месяцев после трансплантации секреция IL-6 в ПБ-мДК была значительно ниже, чем в КМ-мДК (рис. 1В). С другой стороны, экспрессия регулятора иммунных контрольных точек PD-L1 оставалась чрезвычайно высокой в ​​PB-mDC по сравнению с BM-mDC (рис. 1E). Это указывает на наличие иммуносупрессивного признака у PB-mDC. Экспрессия костимулирующих молекул и иммунных контрольных точек была аналогична Carenza et al. [7].

A Процент мДК был выше в BM, чем в PB, в первый месяц после трансплантации (*критерий Стьюдента: p <0,05). B МДК, полученные из BM, экспрессировали более высокие уровни костимулирующего рецептора CD86 (показаны как значения MFI) по сравнению с мДК, происходящими из PB (** t-критерий Стьюдента: p <0,01). C, D ОТ-ПЦР в реальном времени показала постепенное снижение экспрессии IL-6 и TGF-β после трансплантации в PB-mDC, тогда как их уровни в BM-mDC остаются стабильными. (*Т-критерий Стьюдента: p <0,05). E ОТ-ПЦР в реальном времени показала значительно более высокие уровни PD-L1 в PB-мДК по сравнению с BM-мДК (*Т-критерий Стьюдента: p <0,05; ***Т-критерий Стьюдента: p<0,001). Все данные (A–E) представлены как среднее ± SD. F Проценты CD3+, CD4+ и CD8+ Т-клеток были сопоставимы (критерий Стьюдента: p > 0,05) между BM и PB, а также на ранних и поздних этапах наблюдения (ANOVA: p > 0,05). Данные представлены как средние. G Левая панель. Т-клетки CD8+, полученные из BM, демонстрировали более высокую экспрессию костимулирующего рецептора CD28, чем Т-клетки CD8+, полученные из PB (30,3% ± 18,8 против 9,2% ± 4,9; * t-критерий Стьюдента: p <0,05). Данные представлены как среднее ± SD. Правая панель. Экспрессия ингибитора иммунных контрольных точек PD-1 была значительно выше в CD4+, полученных из PB (69% ± 29 против 24% ± 11; *критерий Стьюдента: p < 0,05) и CD8+ (65% ± 25 против 4% ± 3; *Т-критерий Стьюдента: p <0,05) Т-клеток, чем в Т-лимфоцитах, полученных из BM. Данные представлены как среднее ± SD. Совместные культуры H CD3+/CFSE+-мДК показали скорость пролиферации Т-клеток, которая была значительно выше, когда Т-клетки культивировались в присутствии BM-мДК (25% ± 7,2 против 6,7% ± 8,7; *Т-критерий Стьюдента: p < 0,05). ). Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение 3 независимых экспериментов.